Test dell’ureasi

L’ureasi è un enzima, prodotto da alcuni enterobatteri, capace di decomporre l’urea per la sua capacità di attacco sui legami C-N dei gruppi amminici:

ureasi

urea + H₂O CO₂ + NH_{3 +} H₂O

la formazione di ammoniaca determina nel terreno di coltura un ambiente basico. Questa capacità di produrre “ureasi” è utilizzata per un ulteriore differenziazione delle enterobatteriaceae e nella identificazione del genere Proteus.

Sono nettamente negativi Salmonella e Shigella

Tecnica di esecuzione (prova effettuata con il terreno solido Urag )

scopo

Osservare la capacità del microrganismo in esame di produrre l’enzima ureasi

principio

La capacità di produrre l’enzima ureasi è una caratteristica di alcuni Enterobatteri . Il terreno di coltura utilizzato è un agar che viene solidificato a forma di becco di clarino (slant), in provettoni . Dopo aver seminato per strisciamento con un’ansa lo slant ed incubato a 37°C , si osserva il terreno: il cambiamento di colore da arancio al fucsia (controllare: giallo a rosso?),nella parte seminata a becco di clarino , evidenzia la produzione da parte del microrganismo dell’enzima ureasi.

materiale

Terreno di coltura : Urag base, soluzione sterile di urea al 40% Vetreria : beuta, bacchette, spatola, cilindro graduato, provettoni 18×180 con relativi tappi di metallo, imbuto, pipette sterili, ansa. Strumenti: bilancia, autoclave, stufa, termostato a 37°C, bunsen.

Procedimento :

· Scegliere il terreno di coltura: Urea agar base.

· Preparare il terreno di coltura, seguendo le istruzioni riportate sulla confezione.

· Pesare la polvere in base ai calcoli della proporzione effettuata, sciogliere in beuta a caldo sul bunsen, tenendo presente che alla base, dopo la sterilizzazione in autoclave a 121°C , 1 atm, per 15’, andrà aggiunta successivamente una determinata quantità di soluzione al 40% di urea

· Raffreddare ad una temperatura di circa 45°C ed aggiungere in modo sterile la sol. pronta di urea in modo che sia al 5% nel volume complessivo del terreno (es. 5ml di soluzione di urea al 40%, aggiunti a 95ml di agar urea base sterile).

· Utilizzare dei provettoni preventivamente sterilizzati in stufa con i relativi tappi di metallo. Il terreno , ancora liquido, dovrà essere distribuito nei provettoni in modo sterile e messo a solidificare in posizione obliqua per ottenere lo slant.

· Seminare con l’ansa una colonia pura in superficie , in ambiente sterile .

· Incubare in termostato a 37°C per 24/48h.

· Effettuare la lettura : la presenza di cambiamento di colore da arancio a fucsia nella parte superficiale è indice di produzione di ureasi da parte del microrganismo.

Pesata del terreno

Terreno solidificato a becco di flauto

Trapianto in Urag

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